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M15(pREP4)感受態(tài)細(xì)胞

M15(pREP4)感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述:M15(pREP4)感受態(tài)細(xì)胞
M15(pREP4)蛋白表達(dá)菌株含有pREP4質(zhì)粒,該質(zhì)粒通過(guò)p15A復(fù)制子啟動(dòng)復(fù)制,可以與許多原核表達(dá)質(zhì)粒共存于同一大腸桿菌細(xì)胞中;同時(shí)該質(zhì)粒攜帶lac I基因,可高效表達(dá)lac 抑制蛋白,在IPTG誘導(dǎo)前可抑制目標(biāo)蛋白的本底表達(dá),特別適合毒性基因的表達(dá)。

更新時(shí)間:2022-01-20

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

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詳情介紹
品牌其他品牌貨號(hào)BFNC86088
規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

M15(pREP4)感受態(tài)細(xì)胞



產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86088-01(10×100ul)/BFNC86088-02(50×100ul)


M15(pREP4):                                                   100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                           10μl

保存條件(保質(zhì)期):                                   -80℃(6個(gè)月)



基因型

F-, Φ80ΔlacM15, thi, lac-, mtl-, recA+, KmR




產(chǎn)品說(shuō)明


M15(pREP4)蛋白表達(dá)菌株含有pREP4質(zhì)粒,該質(zhì)粒通過(guò)p15A復(fù)制子啟動(dòng)復(fù)制,可以與許多原核表達(dá)質(zhì)粒共存于同一大腸桿菌細(xì)胞中;同時(shí)該質(zhì)粒攜帶lac I基因,可高效表達(dá)lac 抑制蛋白,在IPTG誘導(dǎo)前可抑制目標(biāo)蛋白的本底表達(dá),特別適合毒性基因的表達(dá)。M15(pREP4)菌株是PQE系列質(zhì)粒的配套菌株,特別適合PQE系列質(zhì)?;蛴蒃.coli T5 啟動(dòng)子誘導(dǎo)表達(dá)的質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。pREP4質(zhì)粒賦予該菌株卡那霉素抗性。

青旗生物生產(chǎn)的M15(pREP4)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)2×108cfu/μg DNA。



操作方法

1. M15(pREP4)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒并用手bo打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上(若質(zhì)粒濃度較高,也可稀釋后涂板,務(wù)必保證能在平板上挑到單克隆菌落)。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng),M15(pREP4)菌株在平板或液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),需在培養(yǎng)基中加入終濃度為35ug/ml的卡那霉素。



M15(pREP4)感受態(tài)細(xì)胞


IPTG配制:

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.




注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. M15(pREP4)菌株在平板或液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),需在培養(yǎng)基中加入終濃度為35ug/ml的卡那霉素。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。




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