在動物elisa試劑盒實驗的時候，我們經(jīng)常會遇到樣品濃度接近試劑盒的靈敏度，容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果?；|(zhì)是指樣品中目標分析物以外的部分。由于基質(zhì)成分會對分析過程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱為基質(zhì)效應(yīng)。這是開發(fā)和使用中需要避開的雷。

 

　　下面咱們來說下動物elisa試劑盒的關(guān)鍵試驗步驟：

　　1、重要的洗刷：

　　如果洗刷不充分，會形成一系列的差異和高布景冬導(dǎo)致試驗成果偏差大。如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會添加布景噪音。條件答應(yīng)的情況下，恰當添加洗刷液中的鹽濃度，這會阻撓非特異結(jié)合反響。如果布景過高，置疑洗刷不行時，能夠測驗添加洗刷次數(shù)。

　　2、關(guān)鍵的關(guān)閉：

　　關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的時機。如果布景過高，置疑關(guān)閉不充分，那么能夠測驗運用更高濃度的關(guān)閉液，或恰當延長關(guān)閉時刻現(xiàn)在主要有兩種類型的關(guān)閉液，蛋白和非離子型去污劑。運用的類型須取決于多個要素，包含微孔板的外表試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的關(guān)閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。

　　3、抗體濃度須優(yōu)化：

　　如果試劑稍有不同，則可能需求優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會添加布景。為了防止這一點，切勿運用過多的一抗或二抗。

　　4、檢測試劑要適量：

　　必定不能夠運用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或許未正確稀釋，則會導(dǎo)致高布景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應(yīng)加入停止液。